Создание штаммов-продуцентов.
Получение рекомбинантных белков.

Получаем рекомбинантные белки в E. coli, дрожжах, клетках млекопитающих.
Ведем проекты от дизайна аминокислотной последовательности белка и синтеза генов до разработки опытно-промышленного регламента наработки субстанции рекомбинантного белка фармакопейного качества.
Бесплатная оптимизация гена
Сервис гарантированного получения белка
Срок от 4 недель
Стоимость от 100 000 рублей

Возможная структура проекта:

1.Обсуждение
с заказчиком

  • Определение цели использования
  • Анализ литературы
  • Предложение нескольких вариантов
  • Составление ТЗ
  • Заключение договора

2.Создание
продуцента

  • Дизайн аминокислотной последовательности (биоинформатический анализ, 3D моделирование)
  • Синтез гена и создание экспрессионной конструкции
  • Создание штамма (линии) продуцента
  • Проверка уровня экспрессии

3.Хроматографическая
очистка

  • Выделение белка с использованием тага
  • Разработка технологии хроматографической очистки рекомбинантного белка
  • Проведение рефолдинга при необходимости

4.Контроль
качества

  • Определение чистоты белка и идентичности (масс-спектрометрия, вестерн-блот)
  • Определение концентрации
  • Определение уровня эндотоксина
  • Определение белков и ДНК штамма-продуцента

5.Определение
активности белка

  • Разработка метода и определение активности очищенного рекомбинантного белка
  • Подготовка отчета и отправка белка и продуцента Заказчику

Примеры полученных рекомбинантных
белков и штаммов-продуцентов:

Поведено моделирование структуры гемагглютинина вируса Гриппа,
удален трансмембранный домен
Поведено моделирование структуры гемагглютинина вируса Гриппа,
удален трансмембранный домен
Провели оптимизацию гена для увеличения экспрессии рекомбинантного белка
в клетках E. coli. Увеличение составило 800%.
+IPTG
IPTG
+IPTG
время после индукции, ч
+IPTG
IPTG
время после индукции, ч
Провели оптимизацию гена для увеличения экспрессии рекомбинантного белка
в клетках E. coli. Увеличение составило 800%.
 - пример 1
+IPTG
время после индукции, ч
Провели оптимизацию гена для увеличения экспрессии рекомбинантного белка
в клетках E. coli. Увеличение составило 800%.
 - пример 1
Создали штамм суперпродуцент с уровнем экспрессии рекомбинантного белка >50%.
Разработали технологию выделения и очистки рекомбинантного белка.
Степень чистоты составила >98%.
Создали штамм суперпродуцент с уровнем экспрессии рекомбинантного белка >50%.
Разработали технологию выделения и очистки рекомбинантного белка.
Степень чистоты составила >98%.
 - пример 1
Создали штамм суперпродуцент с уровнем экспрессии рекомбинантного белка >50%.
Разработали технологию выделения и очистки рекомбинантного белка.
Степень чистоты составила >98%.
 - пример 1

Весь спектр услуг:

  • 3D моделирование структуры химерных белков
  • Создание экспрессионных конструкций
  • Получение штамма (линии) продуцента рекомбинантного белка
  • Оптимизация условий культивирования и индукции экспрессии
  • Наработка биомассы штамма продуцента в ферментерах от 2 л до 1000 л
  • Разработка и оптимизация технологии выделения и очистки рекомбинантного белка
  • Разработка и оптимизация технологии рефолдинга рекомбинантного белка
  • Подтверждение идентичности рекомбинантного белка масс-спектрометрическими методами и вестерн-блотом
  • Разработка методики определения специфической активности рекомбинантного белка (ферментативной и тд)
  • Разработка методик контроля качества рекомбинантного белка
  • Масштабирование технологии наработки, выделения и очистки рекомбинантного белка
  • Разработка лабораторного регламента получения рекомбинантного белка
  • Разработка опытно-промышленной технологии получения рекомбинантного белка
  • Трансфер технологий на лабораторную и производственную базу Заказчика
  • Поставка реагентов и оборудования, пуско-наладка и монтаж для разработанной технологической линии
Напишите или позвоните нам, чтобы обсудить ваши исследования —
мы подберем оптимальное решение вашей задачи в соответсвии с мировой практикой и доступным бюджетом:

Информационные материалы

Гетерологичная экспрессия генов в клетках грамотрицательных бактерий E. coli является одним из наиболее эффективных способов получения рекомбинантных белков ввиду хорошо изученной генетики данного микроорганизма, доступности удобных экспрессионных векторных систем и штаммов хозяина, простоты в использовании; низкой цены и высоких уровней экспрессии целевого гена, достигающих 40-45% от общего клеточного белка (Hannig и Makrides, 1998; Baneyx, 1999).

Однако, несмотря на большое количество достоинств E.coli, далеко не всегда можно рутинным способом получить высокий уровень экспрессии целевого гена в данной системе. Среди множества причин, препятствующих эффективному гетерологичному продуцированию рекомбинантного белка в E.coli, можно выделить предпочтение в использовании кодонов, G+C состав экспрессируемого гена, стабильность мРНК, растворимость белка, его токсичность для бактериальных клеток. Использование природных (нативных) генов, в частности вирусных, в гетерологичной экспрессии в клетках E.coli бывает связано с низким уровнем экспрессии (Jana и Deb, 2005).

Кроме классической индукции экспрессии с использованием ИПТГ мы используем автоиндукцию экспрессии генов с использованием 0.2% лактозы по методу Штудиера (Studier, 2005). Данный метод индукции экспрессии является более простой, эффективной и недорогой альтернативой классической индукции с использованием ИПТГ в системах экспрессии, основанных на лактозном опероне. При использовании автоиндукции не требуется ни следить за оптической плотностью культуры клеток, ни добавлять индуктор. От момента инокуляции колонии в автоиндукционную среду до получения биомассы бактерий с ОП600=7-15 с синтезированным целевым белком проходит 15-20 часов. Феномен автоиндукции экспрессии основан на механизмах, которые бактерии используют для регуляции использования источников углерода и энергии, находящихся в питательной среде. Если в питательной среде присутствует глюкоза, то катаболическая репрессия и исключение индуктора препятствуют поглощению лактозы lac пермеазой, которая является продуктом гена lacY (Meadow et al., 1990; Saier и Crasnier, 1996; Inada et al., 1996; Kimata et al., 1997). Когда ресурсы глюкозы исчерпываются, лактоза начинает поглощаться lac пермеазой, внутри бактериальной клетки бета-галактозидаза превращает лактозу в естественный индуктор – аллолактозу (Beckwith, 1987; Huber et al., 1976). Использование в качестве источника углерода и энергии химического вещества, не связанного с индукцией и лактозным опероном (например, глицерол), позволяет практически удвоить выход целевого белка в сравнении с эквивалентными количествами лактозы, как первичного источника энергии. Это связано с тем, что Т7 РНК-полимераза настолько активна, что индукция может направить большую часть клеточной транскрипции и трансляции на продукцию целевого белка (Studier и Moffatt, 1986), которая может перекрываться со способностью метаболизировать лактозу для энергетических нужд. Глицерол не перекрывается с индукцией целевого белка и служит эффективным источником углерода и энергии. Присутствие в среде для автоиндукции 0,05% глюкозы ускоряет процесс роста бактериальных клеток на начальных стадиях и одновременно блокирует индукцию 0,2% лактозой, присутствующей в среде, а 0.5% глицерол, также присутствующий в среде, является эффективным источником углерода и энергии.

Поиск по сайту