05 Сентябрь 2022
474
NGS cеквенирование нового поколения включает три основных шага: создание библиотеки, секвенирование и анализ данных. Библиотека для секвенирования представляет собой ДНК, после ферментативной обработки, совместимую с анализатором. Для подготовки библиотеки методом FTR применяются два фермента: эндонуклеаза, которая случайным образом разрезает двухцепочечную ДНК, и ДНК-полимераза с цепь-вытесняющей активностью (Strand- displacement ДНК-полимераза, SD), которая достраивает каждую цепочку, увеличивая количество матрицы.
При использовании UltraFast Bst ДНК-полимеразы в FTR методе вместо SD ДНК-полимеразы, фермент производства «Иннова плюс» проявил себя, как активный, процессивный, эффективный аналог используемого в методе зарубежного фермента, производства немецкой компании Bioron.
Применение Bst ДНК-полимеразы в методике FTR снижает финансовые затраты на секвенирование: 33 евро на одну реакцию в случае использования реагентики производства NEB против 0,3 евро на одну реакцию применяя UltraFast Bst ДНК-полимеразу; снижает трудозатраты – Bst ДНК-полимераза в методе FTR позволяет сократить процесс на две стадии – очистку и подготовку концов ДНК; уменьшает время реакции на 40% – со 180 минут до 110 минут на подготовку образца для секвенирования.
В условиях санкций и нестабильных зарубежных поставок, применение UltraFast Bst ДНК-полимеразы в NGS секвенировании позволяет импортозаместить зарубежный фермент и проводить секвенирование на российских реагентах.
