Подбор оптимального метода транспортировки и криоконсервации ММСК

15 Ноябрь 2022
25

Абрамова О.А., Фомина Ю.А. Подбор оптимального метода транспортировки и криоконсервации ММСК.

Потребность клинической медицины в технологиях, обеспечивающих эффективное восстановление органов и тканей, утраченных в результате травм, резекции опухолей, аномалий развития и других патологических состояний, приводит к необходимости вести поиск новых подходов к использованию регенеративного потенциала стволовых клеток. Наиболее доступными и безопасными для применения в клинической практике являются аутогенные мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК), получаемые из разных тканей взрослого человека. С возрастом пролиферативная активность и способность к дифференцировке ММСК заметно снижаются, поэтому выделение этих клеток из тканей людей в молодом возрасте и их банкирование позволит сохранить биологический потенциал ранних популяций [1, 2].

Одним из наиболее доступных источников ММСК у детей являются ткани пульпы молочных зубов, выпавших естественным путем [3]. Получение биологического материала из таких зубов относится к неинвазивным методам, поэтому не имеет этических ограничений и может применяться для создания персонального банка стволовых клеток пациента с целью применения, при необходимости, спустя десятки лет. Важным аспектом при разработке технологий забора и хранения клеток и тканей пульпы является сохранение их биологических свойств после криоконсервации.

Для длительного хранения ММСК пульпы выпавшего молочного зуба (в зарубежной номенклатуре — SHED-клеток (от англ. stem cells from humanexfoliated deciduous teeth)) используют разные подходы к криоконсервации: замораживание целого зуба, извлеченной из зуба интактной пульпы и культур SHED-клеток, полученных из тканей пульпы [4—7]. Поскольку пульпа молочных зубов постепенно деградирует по мере резорбции корня зуба, и, следовательно, не каждый образец пульпы содержит жизнеспособные клетки, наиболее эффективно порционно криоконсервировать культуры SHED-клеток.

Результаты недавно проведённого исследования показали, что криоконсервация не влияет на пролиферативный потенциал SHED-клеток [8]. Однако для эффективного применения SHED-клеток с целью стимулирования регенерации костной ткани необходимы данные о влиянии криоконсервации на их способность дифференцироваться остеогенном направлении. Однако, выпавший зуб не всегда удается сразу доставить в лабораторию для выделения МСК. Нами была разработана транспортная среда, позволяющая сохранить клетки до выделения. Были опробованы раствор NaCl с разным % соотношением антибиотика, культуральные среды с различными добавками и выбран оптимальный состав транспортной среды (ООО «Иннова плюс»), при котором были выделены МСК как из пульпы молочных зубов, так и маляров взрослого человека.

ЛИТЕРАТУРА:

  1. Zhu M., Kohan E., Bradley J. et al. The effect of age on osteogenic, adipogenic and proliferative potential of female adipose-derived stem cells. J. Tissue Eng. Regen. Med. 2009; 3(4):290-301.
  2. Yalvac M.E., Ramazanoglu M., Tekguc M. et al. Human tooth germ stem cells preserve neuro-protective effects after long-term cryo-preservation. Current Neurovascular Research 2010; 7(1): 49-58.
  3. Miura M., Gronthos S., Zhao M. et al. SHED: Stem cells from human exfoliated deciduous teeth. PNAS USA 2003;100(10): 5807-12.
  4. Ji E.H., Song J.S., Kim S.O. et al. Viability of pulp stromal cells in cryopreserved deciduous teeth. Cell Tissue Bank 2014;15t1): 67-74.
  5. Lee S.Y., Chiang P.C., Tsai Y.H. et al. Effects of cryopreservation of intact teeth on the isolated dental pulp stem cells. Endod. 2010; 36(8): 1336-40.
  6. Lee H.S., Jeon M., Kim S.O. et al. Characteristics of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) from intact cryopreserved deciduous teeth. Cryobiology 2015; 71(3): 374-83.
  7. Ma L., Makino Y., YamazaH. et al. Cryopreserved dental pulp tissues of exfoliated deciduous teeth is a feasible stem cell resource for regenerative medicine. PLoS One 2012; 7(12): e51777.
  8. Ginani F., Soares D.M., Rabelo L.M. et al. Effect of a cryopreservation protocol on the proliferation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth. Acta Odontol.Scand. 2016; 31: 1-7.

Поиск по сайту