Выдерживание транспортировки при +37oС – 14 дней, при +25oС – 50 дней.
Возможность применения в «полевых условиях».
Все основные реактивы российского производства.
Широкий диапазон измерения концентраций аналита, составляющий от нескольких десятков пикограмм до нескольких микрограмм, что обеспечивает с одной стороны, высокую чувствительность метода, с другой – детекцию относительно высоких концентраций анналита-мишени при минимальном количестве разведений, тем самым снижая вероятность погрешности пробоподготовки.
Метод обеспечивает высокую точность определения аналита: отклонение результата измерения внутри одной постановки не превышают 10%, между постановками – не более 15%
Благодаря применению высокоспецифичных моноклональных и поликлональных антител, достигается низкий уровень ложноположительных реакций. Это означает, что тест-системы на основе ИФА, помимо высокой чувствительности, обладают исключительной реактивностью только с определенным аналитом или группой аналитов.
Высокая прецизионность результата определения: при исследовании образцов в нескольких повторностях вариации результата измерения не превышают 8%.
Возможность определения как количественного, так и качественного содержания аналита. В последнем случае не требуется дополнительного оборудования, то есть оценка результата происходит визуально.
Анализ обладает высокой толерантностью по отношению к различным матриксам: аналит может быть извлечен из образца посредством предварительной экстракции, после чего полученный экстракт исследуется в тест-системе. Данный подход обеспечивает возможность детекции аналита как в твердых, так и в жидких образцах, вне зависимости от их исходного состава.
Возможность одновременного тестирования до 40 образцов при количественном исследовании, и 46 образцов при качественном исследовании содержания аналита.
Существуют два варианта исполнения ИФА тест-систем: основанные на принципе двухсайтового «сэндвича» и конкурентные ИФА, где происходит ингибирование реакции образования комплекса «антиген-антитело» на поверхности полистиролового планшета аналитом из пробы, степень которого прямо пропорциональна концентрации аналита в пробе.
В лунки микропланшета с сорбированными на их поверхности антителами против антигена-мишени (аналита), вносят исследуемый образец. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки, а несвязавшийся антиген и части матрикса удаляются отмывкой. После этого в лунки вносятся вторые антитела к этому же антигену с меткой (конъюгат), в качестве которой чаще всего используется пероксидаза хрена. Лунки промывают повторно для удаления излишков конъюгата, после чего вносят специальную хромоген-субстратную смесь, способную при взаимодействии с ферментом образовывать окрашенный продукт. Количество такого продукта, и, соответственно, интенсивность окрашивания, прямо пропорционально количеству аналита в пробе. Реакцию останавливают и оптическую плотность в лунках измеряют фотометрически.
Постановка иммуноферментных реакций в двустадийном формате имеет неоспоримое преимущество: в «сэндвич» тест-системах при таком подходе отсутствует явление т.н. «хук-эффекта» – ингибирование формирования сэндвича при высоких концентрациях аналита; в свою очередь, при одностадийной постановке «сэндвич» систем, несмотря на большее удобство исполнения, может присутствовать возможность «хук-эффекта», соответственно, получения ложноотрицательного результата в таком случае выше.
Посредством ИФА в формате «сэндвич» в основном определяют белковые антигены и высокомолекулярные соединения.
При исследовании содержания аналитов методом конкурентного ИФА конечная цель также состоит в получении комплекса «антиген-антитело», иммобилизованного в лунке микропланшета, однако в этом случае есть ряд принципиальных особенностей.
В лунки микропланшета с сорбированным на их поверхности антигеном (таким же, как и искомый аналит) одновременно вносят как исследуемый образец, предположительно содержащий интересующий антиген, так и антитела к этому же антигену, меченные пероксидазой хрена. В результате протекающих взаимодействий, антиген из пробы связывается с меченными антителами, приводя т.о. к ингибированию формирования комплекса «антиген-антитело» с антигеном поверхности лунки. По завершении инкубации лунки промывают от реакционной смеси, после чего, как и в первом случае, вносят специальную хромоген-субстратную смесь, способную при взаимодействии с ферментом образовывать окрашенный продукт. Здесь количество такого продукта, как и интенсивность окрашивания, обратно пропорционально количеству аналита в пробе. Реакцию останавливают и оптическую плотность в лунках измеряют фотометрически.
Посредством конкурентного ИФА в формате «сэндвич» в основном определяют низкомолекулярные аналиты: гормоны, пептиды, микотоксины и пр.
