10 Январь 2025
815
Компания «Иннова Плюс» получила патент № RU2799413C1 на cпособ выявления Streptococcus mutans методом изотермической петлевой амплификации.
Изобретение относится к области медицины, биотехнологии, микробиологии и молекулярной биологии, в частности к молекулярно-биологическим способам детекции микроорганизмов. Предложен способ выявленияStreptococcus mutansметодом изотермической петлевой амплификации. В исследуемый образец слюны напрямую добавляют 0,12 мМ HNB, Bst ДНК-полимеразу, 1 × реакционный буфер (20 мM Tris-HCl, 10 мM (NH4)2SO4, 10 мM KCl, 2 мM MgSO4, 0,1% Тритон®-X-100, pH 8,8), 5–8 мМ сульфата магния, 1,4 мМ дезоксинуклеотидтрифосфатов, набор праймеров. Выдерживают при температуре 60–65°С в течение не менее 15 минут, затем детектируют наличие в исследуемом образце ДНК Streptococcus mutans по изменению окраски реакционной смеси с фиолетовой на голубую. Набор праймеров выбирают из набора, включающего праймеры с нуклеотидной последовательностью Seq Id No: 13-16, 54, набора, включающего праймеры с нуклеотидной последовательностью Seq Id No: 19-22, 55, набора, включающего праймеры с нуклеотидной последовательностью Seq Id No: 23-26, 58, и набора, включающего праймеры с нуклеотидной последовательностью Seq Id No: 19-22, 55 и Seq Id No: 23-26, 58, а количество праймеров составляет 1,6 мМ для внутренних праймеров (FIP, BIP, Seq Id No: 13, 14 или 21, 22 или 23, 24), 0,2 мМ для наружных праймеров (F3, B3, Seq Id No: 15, 16 или 19, 20 или 25, 26) и 0,8 мМ для прямого петлевого праймера (LF, Seq Id No: 54, или 55, или 58). Изобретение позволяет быстро выявлятьStreptococcus mutansв образце слюны без пробоподготовки с чувствительностью не ниже 10-4нг/мкл и специфичностью 100%.
